Identificação de genes expressos durante a interacção cv. Florina – V. inaequalis por differential display-Rt-Pcr

Resumo

Para identificar genes especificamente regulados durante a expressão do mecanismo de resistência ao pedrado na macieira cv. Florina, comparou-se o padrão de expressão genética em plantas após inoculação com uma suspensão conidial do fungo Venturia inaequalis, com o padrão em plantas inoculadas com água, por differential display RT-PCR. Os produtos das reacções de amplificação resultantes da combinação de um oligodT (dT_VG) com 20 iniciadores decameros de sequência arbitrária foram separados em gel desnaturante de poliacrilamida e detectados com nitrato de prata. 14 fragmentos de cDNA visíveis apenas na amostra derivada de folhas inoculadas com a suspensão, ou em maior abundância nesta amostra, foram extraídos do gel para purificação, reamplificação e clonagem. Três fragmentos foram já sequenciados, revelando uma sequência forte homologia com uma fitoquelatina sintetase vegetal, potencialmente envolvida em respostas a factores de stress. A acumulação diferencial deste cDNA em resposta à inoculação será verificada por transcrição-reversa-PCR com iniciadores específicos.