Mediadores do Filme Lacrimal Após Cross-Linking Corneano: Validação de Metodologia

Autores

  • Celso Costa Department of Ophthalmology, Centro Hospitalar e Universitário de Coimbra (CHUC), Coimbra, Portugal https://orcid.org/0000-0002-7111-1002
  • Mariana Araújo Faculty of Medicine, University of Coimbra (FMUC), Coimbra, Portugal https://orcid.org/0000-0001-6808-8959
  • Andreia Rosa Department of Ophthalmology, Centro Hospitalar e Universitário de Coimbra (CHUC), Coimbra, Portugal https://orcid.org/0000-0001-6608-3353
  • João Gil Department of Ophthalmology, Centro Hospitalar e Universitário de Coimbra (CHUC), Coimbra, Portugal https://orcid.org/0000-0001-9032-1008
  • Maria João Quadrado Department of Ophthalmology, Centro Hospitalar e Universitário de Coimbra (CHUC), Coimbra, Portugal https://orcid.org/0000-0002-5881-9161
  • Cristina Tavares Department of Ophthalmology, Centro Hospitalar e Universitário de Coimbra (CHUC), Coimbra, Portugal
  • Esmeralda Costa Department of Ophthalmology, Centro Hospitalar e Universitário de Coimbra (CHUC), Coimbra, Portugal
  • Rosa Fernandes Coimbra Institute for Clinical and Biomedical Research, Coimbra, Portugal.
  • Lígia Costa Department of Ophthalmology, Centro Hospitalar e Universitário de Coimbra (CHUC), Coimbra, Portugal
  • Pedro Melo Department of Ophthalmology, Centro Hospitalar e Universitário de Coimbra (CHUC), Coimbra, Portugal
  • Joaquim Murta Department of Ophthalmology, Centro Hospitalar e Universitário de Coimbra (CHUC), Coimbra, Portugal

DOI:

https://doi.org/10.48560/rspo.25967

Palavras-chave:

Cross-linking, Citocinas, Lágrimas, Mediadores da Inflamação, Queratocone

Resumo

Introdução: Atualmente, o tratamento gold-standard do queratocone (QC) progressivo é o cross-linking do colagénio corneano (CXL), no qual a riboflavina e a radiação ultravioleta-A aumentam a rigidez biomecânica da córnea, parando a progressão. No entanto, os resultados pós-operatórios variam significativamente entre os doentes. Embora se tenha sugerido na literatura que a espessura da córnea, a localização do cone e a idade do doente são fatores importantes, a contribuição destes fatores é controversa. A razão para esta variabilidade permanece incógnita. Este projeto visa descobrir biomarcadores que possam explicar a variabilidade dos resultados cirúrgicos após CXL corneano, investigando a correlação entre o ambiente inflamatório local da córnea e estes resultados. A nossa hipótese é que melhores resultados pós-operatórios estão relacionados com uma redução nos níveis de citocinas inflamatórias no filme lacrimal dos doentes. Em última instância, pretendemos otimizar os resultados cirúrgicos dos pacientes de acordo com o seu ambiente inflamatório corneano.
Métodos: O nosso protocolo de pesquisa foi estabelecido após testagem de diferentes métodos de colheita de amostras. Os doentes são entrevistados para avaliar os seus antecedentes pessoais e hábitos relevantes. Os dados tomográficos da córnea e a melhor acuidade visual corrigida são registados antes e 6 meses após a cirurgia. Amostras de filme lacrimal dos doentes são colhidas duas vezes, com 6 meses de intervalo, usando tiras de Schirmer, pois o volume conseguido é maior em comparação com os métodos diretos (tubos microcapilares ou micropipetas), que são mais difíceis de realizar e requerem estimulação ou instilação de solução salina no fundo de saco conjuntival, originando lacrimejo reflexo. As amostras são analisadas quanto ao seu conteúdo de proteína total (BCA Protein Assay Kit) e concentração de citocinas através de tecnologia Multiplex (Th1/Th2/Th9/Th17 Cytokine 18-Plex Human ProcartaPlex™ Panel) e não ELISA, como previamente tentado. A análise estatística para avaliar as diferenças entre as amostras e a correlação entre a concentração de citocinas e índices tomográficos e valores de acuidade visual para cada grupo e subgrupo é realizada aos 6 meses.
Resultados: Vinte doentes e oito controlos foram incluídos no estudo e a primeira colheita de lágrimas foi realizada. As cirurgias de CXL dos vinte doentes foram realizadas de outubro de 2020 a setembro de 2021. Duas amostras foram perdidas devido ao comprimento excessivo da tira de Schirmer, facto que melhorámos cortando a parte seca da tira. Além disso, as amostras de filme lacrimal dos primeiros oito doentes e dos 8 controlos foram processadas com sucesso para obtenção do conteúdo de proteína total.
Conclusão: A análise do filme lacrimal apresenta vários desafios, tendo em conta a pe-quena quantidade de material disponível sem estimulação da produção de lágrimas reflexa. Este facto impossibilita o uso de ELISA convencional, exigindo assim tecnologia multiplex modificada. Ao lidar com lágrimas, também é crucial evitar a contaminação, através do uso de material esterilizado, evitar a diluição e estabelecer um eficiente fluxo de amostras do hospital para o laboratório. Este estudo piloto permitiu identificar várias fragilidades metodológicas e estabelecer um protocolo de investigação sólido que pode ser replicado por outros investigadores. Compreender a correlação entre citocinas inflamatórias e resultados cirúrgicos do CXL pode permitir a otimização e personalização do CXL. Além disso, é expectável que os resultados deste protocolo estabeleçam fatores prognósticos para os resultados cirúrgicos do CXL, melhorando, em última análise, a qualidade de vida dos doentes com QC.

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Publicado

2023-03-28

Como Citar

Costa, C., Araújo, M., Rosa, A., Gil, J. ., Quadrado, M. J., Tavares, C., Costa, E., Fernandes, R., Costa, L., Melo, P., & Murta, J. (2023). Mediadores do Filme Lacrimal Após Cross-Linking Corneano: Validação de Metodologia. Revista Sociedade Portuguesa De Oftalmologia, 47(1), 7–17. https://doi.org/10.48560/rspo.25967

Edição

Secção

Artigos Originais